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人生就是博-尊龍凱時(shí)的TurboTEV蛋白酶是基于煙草蝕刻病毒（TEV）N1a蛋白的增強(qiáng)形式，這是一種半胱氨酸蛋白酶，能夠特異性識(shí)別并切割位于Gln與Gly之間的序列（Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly）。此酶被認(rèn)為是一種高效且穩(wěn)定的限制性蛋白酶，尤其在4°C時(shí)展現(xiàn)出強(qiáng)大的活性，且無(wú)需任何特殊緩沖液即可在適合目標(biāo)蛋白的條件下使用。

TurboTEV蛋白酶的分子量為52 kDa，帶有GST和His標(biāo)簽，便于通過(guò)Ni螯合或谷胱甘肽（GSH）樹(shù)脂輕松去除融合標(biāo)簽。此蛋白酶來(lái)源于大腸桿菌，其活性超過(guò)10單位/μg，意味著在30°C時(shí)，1單位的TurboTEV蛋白酶能夠有效裂解3μg底物的85%。

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 在溶液中裂解

A. 配制新鮮的冰冷透析緩沖液。示例緩沖液：25 mM Tris-HCl，pH 8.0，150-500 mM NaCl，14 mM β-巰基乙醇。

B. 稀釋目標(biāo)蛋白樣品

• (a) 使用透析緩沖液將目標(biāo)蛋白樣品稀釋至1-2 mg/mL。注意：如目標(biāo)蛋白在透析緩沖液中聚集，則可略去此步驟。
• (b) 留出一小份未切割樣品以備分析。如果目標(biāo)蛋白樣品是從鎳柱洗脫而來(lái)的，并且EDTA與目標(biāo)蛋白兼容，可以加入005 mM的EDTA。

C. 添加TurboTEV蛋白酶，按1:100（w/w）的比例加入，即100 mg的目標(biāo)蛋白對(duì)應(yīng)10000單位（1 mg）TurboTEV蛋白酶。

D. 在4°C下，使用透析緩沖液透析約16小時(shí)。

2. 去除TurboTEV蛋白酶

A. 上柱處理

B. SDS-PAGE分析（可選）

產(chǎn)品應(yīng)用

• 蛋白裂解功能
• 從重組蛋白中去除融合標(biāo)簽
• 蛋白質(zhì)和肽的純化

常見(jiàn)問(wèn)題解答

1. 問(wèn)：TEV消化反應(yīng)的緩沖液條件有多重要？是否有可能對(duì)TurboTEV的剪切效率產(chǎn)生不利影響？

答：以下條件可能影響效率：1 mM DTT是可接受的，建議避免10%甘油、20 mM組氨酸、500 mM NaCl及100 mM Tris-HCl，而β-巰基乙醇可以與DTT一樣使用。

2. 問(wèn)：剪切之前是否需要緩沖液交換蛋白質(zhì)？

答：這通常是必要的。

通過(guò)選擇人生就是博-尊龍凱時(shí)的TurboTEV蛋白酶，您可以在生物醫(yī)療研究中實(shí)現(xiàn)更高效的蛋白質(zhì)剪切與純化，為您的實(shí)驗(yàn)和產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。